【出 处】：《 中国男科学杂志 》 CAS CSCD 2010年第4期 7-10页,共4页

【作 者】： 孙黎黎 [1] ; 易维京 [2] ; 吴玉章 [3] ; 龙玲 [1] ; 向云龙 [1] ; 胡川闽 [2] ; 梁志清 [1] ; 何畏 [1]

【摘 要】 目的构建人附睾蛋白酶抑制蛋白（epididymal protease inhibitor，eppin）基因原核表达质粒，表达并纯化重组蛋白，并探讨其抗原性及应用价值。方法以健康人睾丸组织cDNA为模板进行PCR扩增，将其克隆到原核表达载体pET-32a，并转化大肠埃希菌BL21（DE3），异丙基-B—D硫代半乳糖苷（IPTG）进行诱导表达，经Ni^2＋-NTA亲和层析柱纯化，并对纯化产物进行Western印迹鉴定。结果重组质粒经双酶切分析和测序鉴定后证实构建成功；SDS—PAGE结果显示表达产物为相对分子质量36KD的融合蛋白，Western印迹检测纯化后蛋白显示特异性条带。结论成功构建了pET-32a—Eppin重组质粒，并获得了具有抗原特异性的可溶性Eppin蛋白，为进一步研究其生物学活性及免疫性避孕效应奠定了基础。