SMART技术构建恒河猴睾丸组织全长cDNA文库
【出 处】:
【作 者】:
陈厚仰
[1] ;
汤育新
[1] ;
文甲明
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尹光明
[1] ;
刘志中
[1] ;
肖小旺
[1]
【摘 要】
目的运用SMART技术构建恒河猴睾丸组织全长cDNA文库。方法提取恒河猴睾丸组织总RNA并分离出mRNA,用clontech公司SMART^TMcDNA文库构建试剂盒反转录合成第一链cDNA,LD—PCR扩增获得全长cDNA双链;经SfiI酶切、层析柱分离后,500bp以上的片段与pDNR—LIB连接后电转化及铺板,建成原始文库。结果经鉴定,原始文库为2.5×10^6个重组子,扩增后文库滴度为4.5×10^9CFU/mL。重组率为100%,平均插入片段为1.6kb。结论已构建文库质量较高,为进一步筛选、克隆睾丸特异表达基因奠定了基础。
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