改良消化富集法提高精原干细胞富集效率的实验研究
【出 处】:
【作 者】:
胡卫
[1] ;
张茨
[2] ;
廖文彪
[2] ;
吴永超
[2] ;
申复进
[2]
【摘 要】
目的建立一种改良的小鼠精原干细胞消化富集方法,为精原干细胞体外长期培养和移植奠定基础。方法收集t20个出生4—6dBALB/c新生小鼠的睾丸,平均分为对照组和实验组,分别采用传统的两步消化法(对照组)和改良消化法(实验组)分离消化获得细胞悬液,并种植到铺有明胶的培养皿中,于种植后1h、5h、24h通过差速贴壁法去除体细胞,获得富集的精原干细胞。以Thy.1作为精原干细胞的表面标志,分别在3次差速贴壁前、后采用流式细胞仪检测Thy.1阳性细胞的比例,比较两组精原干细胞的富集效率。结果实验组和对照组消化所获得的细胞数分别为(3.4±0.5)×10^5/睾丸和(3.6±0.3)×10^5/睾丸,无统计学差异(P〉0.05)。然而,实验组细胞贴壁具有良好的活性,初次贴壁仅需40-50min,而对照组细胞需要4-5h甚至过夜培养才能贴壁。3次差速贴壁后,实验组Thy.1阳性细胞占睾丸细胞的比例为(56.3±4.7)%,而对照组仅为(32.6±4.2)%,差异具有统计学意义(P〈0.01)。结论改良消化富集法能明显提高睾丸细胞活性和富集效率,可获得大量高度纯化的精原干细胞,为精原干细胞培养和移植奠定基础。
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