Stra8基因启动子逆转录病毒包装细胞株的建立
【出 处】:《
中国男科学杂志
》
CAS
CSCD
2011年第25卷第6期 3-6页,共4页
【作 者】:
漆正宇
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崔光辉
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郭新
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秦洁
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张艳敏
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桂耀庭
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蔡志明
【摘 要】
目的建立小鼠Stra8基因启动子控制绿色荧光蛋白EGFP表达(Pstra8-EGFP)的逆转录病毒包装细胞株,以方便地将Pstra8-EGFP转导到目的细胞,为生殖细胞鉴定分选提供基础。方法PCR扩增小鼠基因组DNA中的Stra8基因启动子片段,构建Stra8基因启动子控制表达的EGFP报告基因逆转录病毒质粒。将质粒脂质体法转染PT67病毒包装细胞,G418抗性筛选后,梯度稀释法将包装细胞单克隆化并扩增成多个细胞株。以包装细胞培养上清液感染NIH3T3细胞的所形成的G418抗性阳性细胞数定义病毒滴度,确定高滴度病毒包装细胞株。通过染毒小鼠骨髓间充质干细胞(mouse bone marrow mesenchymal stemcells,MSCs)验证该细胞株的Pstras8-EGFP转导效果。结果所建立的病毒包装细胞株培养上清液滴度达到1.3×10^6 cfu/ml。MSC经包装细胞培养上清液感染后,在(retinoicacid,RA)诱导下能表达EGFP蛋白。结论成功构建了将Pstras.EGFP转导到目的细胞的PT67逆转录病毒包装细胞株。
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