【出 处】：《 中国男科学杂志 》 CAS CSCD 2009年第23卷第1期 6-9页,共4页

【作 者】： 江智茂 [1] ; 唐爱发 [1] ; 郑锦芬 [1] ; 周永翠 [1] ; 桂耀庭 [1] ; 蔡志明 [1]

【摘 要】 目的构建含有增强型绿色荧光蛋白（EGFP）报告基因的睾丸特异性新基因T490超表达质粒pDT490-EGFP，检测其在Hela细胞中的表达情况。方法采用RT-PCR的方法从成年Balb／c小鼠睾丸组织中扩增T490基因，将该基因连接克隆到含有增强型绿色荧光蛋白（EGFP）报告基因的真核表达载体pEGFP-N1上，再将T490和EGFP融合基因酶切下来，克隆到pcDNA3．1（-）真核超表达载体上，以构建重组质粒pDT490-EGFP。将该莺组质粒通过阳一件脂质休Lipofectamine 2000导入Hela细胞系中，存荧光碌微铸下观察转谌24h后融合基因的超表达情况，并用RT-PCR的方法进一步证实目的基因mRNA的表达水平。结果RT-PCR获取编码T490基因的全序列cDNA，大小为508bp;DNA测序和PCR方法证实T490和EGFP融合基因成功克隆到真核超表达载体上；在荧光显微镜下，转染24h后的Hela细胞具有很强的绿色荧光：RT-PCR显示转染后的Hela细胞T490基因mRNA的表达明显。结论重组质粒pDT490-EGFP构建成功，并在细胞内明显表达，此质粒可应用于研究睾丸特异性新基因T490的功能，为T490的生物学研究奠定基础。