睾丸特异性新基因T490真核荧光表达载体的构建及其表达
【出 处】:《
中国男科学杂志
》
CAS
CSCD
2009年第23卷第1期 6-9页,共4页
【作 者】:
江智茂
[1] ;
唐爱发
[1] ;
郑锦芬
[1] ;
周永翠
[1] ;
桂耀庭
[1] ;
蔡志明
[1]
【摘 要】
目的构建含有增强型绿色荧光蛋白(EGFP)报告基因的睾丸特异性新基因T490超表达质粒pDT490-EGFP,检测其在Hela细胞中的表达情况。方法采用RT-PCR的方法从成年Balb/c小鼠睾丸组织中扩增T490基因,将该基因连接克隆到含有增强型绿色荧光蛋白(EGFP)报告基因的真核表达载体pEGFP-N1上,再将T490和EGFP融合基因酶切下来,克隆到pcDNA3.1(-)真核超表达载体上,以构建重组质粒pDT490-EGFP。将该莺组质粒通过阳一件脂质休Lipofectamine 2000导入Hela细胞系中,存荧光碌微铸下观察转谌24h后融合基因的超表达情况,并用RT-PCR的方法进一步证实目的基因mRNA的表达水平。结果RT-PCR获取编码T490基因的全序列cDNA,大小为508bp;DNA测序和PCR方法证实T490和EGFP融合基因成功克隆到真核超表达载体上;在荧光显微镜下,转染24h后的Hela细胞具有很强的绿色荧光:RT-PCR显示转染后的Hela细胞T490基因mRNA的表达明显。结论重组质粒pDT490-EGFP构建成功,并在细胞内明显表达,此质粒可应用于研究睾丸特异性新基因T490的功能,为T490的生物学研究奠定基础。
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